Определение группы крови по стандартным сывороткам используется часто (по сравнению с другими методиками). В основе данной техники содержащиеся в крови агглютинины и агглютиногены в различных комбинациях.
Соединение одноименных агглютиногена и агглютинина сопровождается реакцией агглютинации (однородное пятно распадается на многочисленные мелкие пятна, состоящие из эритроцитов, склеившихся между собой).
Суть метода
При оказании медицинской помощи не всегда удается быстро остановить кровотечение, для переливания требуется определение группы крови, резус-фактора.
Существуют 2 эритроцитных антигена (агглютиногены А и В) и 2 антитела (а и b). Различные комбинации антигенов и антител образуют 4 группы крови.
Данный способ имеет преимущества, т. к. позволяет свести к одному многочисленные измерения.
Методика определения показателей
Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.
Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).
Изготовление сыворотки
Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.
Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.
Манипуляцию повторяют, пока не получат разведение смеси в пропорции 1:256. Другие разведения не используют, чтобы исключить возникновение ошибки.
Для одного исследования группы крови с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:
- I (0) прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой,
- II (А) жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета,
- III (В) бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками,
- IV(АВ) желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.
На этикетках указаны:
- титр,
- срок годности,
- дата выпуска,
- серийный номер.
- данные об изготовителе.
Проведение исследования
Температура в помещении должна быть в пределах +15…,+ 25°С, требуется хорошее освещение.
Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них контрольный, 2 для диагностики).
Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:
- если происходит реакция агглютинации сывороточный тест считается положительным,
- при отсутствии агглютинации тест отрицательный.
Результаты исследования
В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).
Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:
- I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции,
- II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция,
- III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной,
- IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.
Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.
Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.
(Пока оценок нет)
Загрузка...
